تأثیر فلز کبالت بر سینتیک و ساختار آنزیم تایروزیناز قارچ خوراکی

مقدمه و هدف: تایروزیناز به عنوان یک آنزیم مؤثر در سطوح متفاوت حیات نشان داده شده است. این اهمیت هم از نظر عملکرد و هم از نظر ساختار و پایداری آنزیم مهم است. تنوع سوبسترایی آنزیم، امکان بررسی لیگاندهای متفاوت روی سینتیک آنزیم در هر دو فعالیت کاتکولازی و کرزولازی را فراهم می کند. عملکرد سینتیکی پیچیده آنزیم و نیز فعالیت و ساختار آن در این دو واکنش پی درپی از نظر مکانیسمی هنوز به خوبی شناخته نشده است.   هدف: تعیین تأثیر فلز کبالت بر سینتیک و ساختار آنزیم تایروزیناز قارچ خوراکی   مواد و روش کار: در این مطالعه، ساختار آنزیم با استفاده از تکنیک‏های دو رنگ‏نمایی حلقوی ( cd ) و فلوئورسانس و نیز فعالیت سینتیکی آن با استفاده از سوبسترای طبیعی کافئیک اسید در حضور یون فلزی co2 + با غلظت‏های صفر، 2/0، 6/0 و 9/0 میلی‏مولار و در ph برابر 6، 7، 8 و 9 بررسی شد. ثابت های α و β که تأثیر فعال‏کننده برروی آنزیم و تمایل آن به سوبسترا را نشان می‏دهند با ترسیم منحنی‏های ثانویه لاینووربرک برای آنزیم و co2 + به دست آمدند.   نتایج: سینتیک فعال‏سازی آنزیم تایروزیناز برای یون فلزی فوق از الگوی فعال‏کننده غیرضروری پیروی کرد. مقادیر α (1α <) نشان می‏دهد، پیوند لیگاند فلزی با آنزیم باعث افزایش تمایل سوبسترا به آن می‏شود. مقادیر β (1<β ) نیز نشان می‏دهد، پیوند سوبسترا به آنزیم می‏تواند تسریع حداکثر سرعت آنزیم را از طریق افزایش ثابت کاتالیتیکی آنزیم ( kcat ) به دنبال داشته باشد. بیشترین فعالیت آنزیم در عدم حضور یون co2 + در ph برابر هفت به دست آمد. بررسی ساختاری آنزیم با تکنیک‏های فلوئورسانس و بیضی واری حلقوی نشان داد، در ph برابر 9، co2 + چه از نظر ساختار دوم و چه ساختار سوم پایداری آنزیم را به دنبال دارد.   نتیجه‏گیری : به طور خلاصه، نتایج حاصل از مطالعات سینتیکی و ساختاری آنزیم، الگوی فعال‏سازی غیرضروری آنزیم را توسط لیگاند فلزی co2 + نشان داد. پیوند احتمالی این لیگاند در نزدیکی موضع فعال، فعال‏سازی آنزیم را از طریق اثر آلوستریکی به دنبال خواهد داشت. از طرفی لزوماً شرایط مناسب فعالیت آنزیم همان شرایط مناسب پایداری آنزیم نخواهد بود.